两种方法在宫颈癌及癌前病变中的诊断价值

【摘 要】目的： 评价液基薄层细胞学技术（ TCT） 联合检测人乳头瘤病毒HPVE6/E7 mRNA 在子宫颈病变中的诊断价值。方法：对108 例病理结果为宫颈上皮内瘤变（ CINI、II、III）及宫颈癌的患者，同时TCT 及人乳头瘤病毒HPVE6/E7 mRNA 检测，比较两种方法的检出敏感度。结果： TCT 检测阳性者78 例，敏感度为72. 2%，人乳头瘤病毒HPVE6/E7 mRNA 检测阳性者89 例，敏感度82.4%，经统计学分析，TCT 及人乳头瘤病毒HPVE6/E7 mRNA 检测两种方法的检测结果没有统计学差异（ P >0. 05） 。结论：该两种方法在宫颈早期病变的筛查中不能相互替代； 两种方法联合应用可使阳性检出率提高。

【关键词】液基薄层细胞检测技术（ TCT） 人乳头瘤病毒HPVE6/E7 mRNA 宫颈病变

【中图分类号】R737 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）13-0124-01

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，我国每年新发病例约13万多，占世界发病总数的1 /3[1]，近年来宫颈癌的发病呈逐年上升的趋势，流行病学和基础研究已经证实人乳头瘤病毒（ humanpapillomavirous，HPV） 感染是宫颈上皮内瘤变（ cervical intraepithelial neoplasia，CIN） 和宫颈癌的主要病因[2]，HPV-16 E6和E7蛋白是HPV的癌蛋白。HPV-16 E6 、E7抗体比HPV-16 L1或VLP具有更高的特异度。特别是高危型HPV 感染被认为是宫颈癌前病变和浸润性宫颈癌变的首要因素，是宫颈癌前病变和浸润性宫颈癌发生的必要条件，HPV 感染特别是高危型HPV 感染高度预示着宫颈上皮内瘤变的存在，E6/E7 mRNA主要测定宫颈癌相关基因的表达，主要是mRNA的表达。近年来多项研究证明，HPV相关肿瘤恶性转化必须先使HPV E6/E7病毒基因过表达，随后病毒整合到宿主基因中，这两种癌基因通过抑制P53和pRb（两种肿瘤抑制蛋白）促进细胞无规则生长。已证实，测定E6/E7有助于区分一过性感染（低表达）和发展为癌（高表达）的人群，可作为妇女筛查的重要靶点[3]。这一发现使宫颈癌成为可以预防和早期发现治愈的疾病。本研究对常规宫颈病检确诊的宫颈病变的患者，回顾性比较TCT 检测及HPVE6/E7 mRNA检测的敏感度及两种方法的检出率。探讨两者的相关性，并评价其各自在诊断宫颈癌及其癌前病变中的作用。

1 资料与方法

1.1 研究对象：研究病例均选择2012年1月至2012年7月来我院妇科就诊的病人，其宫颈活检病理结果为宫颈上皮内瘤变（ CINI、II、III）及宫颈癌的患者共108 例，其中CIN I 33例 、CIN II 16例 、CIN III 32例 .SCC 27例。年龄30 ～ 58岁，平均年龄45 岁，已婚。在108例病例中，同时进行TCT 检查及HPVE6/E7 mRNA检测，对其结果建立医学档案，进行临床研究。

1.2 研究方法

1.2.1 采用TCT 行宫颈细胞学检查 检查前3 天不使用阴道内药物，不做阴道冲洗，24 h 内禁止性行为，并在非经期检查。TCT 检查： 用专用宫颈刷收集宫颈外口和颈管内的脱落细胞，将收集的细胞洗入盛有Thin Prep 保存液的样品瓶内，经Thin Prep 2000 系统处理后，制成直径2cm 的薄层细胞涂片，95%酒精固定，HE 染色。细胞学诊断采用TBS 分类法，即正常（ 阴性） 、意义不明不典型鳞状细胞（ ASCUS） 、低度鳞状上皮内瘤变（ LSIL） 、高度鳞状上皮内瘤变（ HSIL） 和鳞状上皮癌（ SCC） 。ASCUS 以上病变即判为细胞学检查阳性。

1.2.2人乳头瘤病毒HPVE6/E7 mRNA检测。取材由妇科医生以窥器暴露宫颈，然后使用专用的HPV 采样刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷，使其顺时针旋转5 周，收集宫颈口及颈管的脱落上皮细胞，并将采样刷头部放入装有CytoRich 保存液的小瓶内，小瓶上贴有被调查对象的识别号。收集在CytoRich 保存液中的宫颈标本用于HPVE6/E7 mRNA检测。

1.2.3 病理学检查阴道镜下对病变最严重处多点取材活检，如无异常，则常规取移行带第3、6、9、12 点4 处。本研究以病理组织学结果为金标准： 活检异常标准为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌。

1.3 统计学方法采用χ2检验统计分析结果。

2 结论

2.1 TCT 技术筛查诊断及病理学诊断结果

108例宫颈活检CIN I-III级及宫颈癌患者，其中TCT筛查结果正常者3 例，宫颈炎8例，ASCUS 19例，LSIL 17例，HSIL38例，SCC 23 例。以TCT结果LSIL以上为阳性。阳性率为72。2%（78/108）。

2.2 HPV E6/E7mRNA感染及病理学诊断结果

108例宫颈活检CIN I-III 级及宫颈癌患者，HPVE6/E7 mRNA检测结果显示，其中CIN I-III 级63例，阳性率 80.7%；宫颈癌26例 ，阳性率 86.7% 。总阳性率为82。4%（89/108）。

2.3 用TCT 及HPV E6/E7mRNA两种检测方法检出病理阳性例数的敏感度，在108例结果中HPV E6/E7感染阳性为89 例，TCT 阳性为78 例，两者敏感度相近（82.4%和72. 2% ） ，两者的检测结果比较，X2=2.640，P=0.104，P> 0. 05，说明两者结果没有统计学差异

2.4 TCT 检测及HPVE6/E7 mRNA联合检测检出率及病理学诊断结果。

108例 宫颈活检CIN I-III 级及宫颈癌患者中，HPVE6/E7mRNA检测阳性的89例患者中，其中TCT 检测阳性的有75例，TCT检测阴性有14例，故TCT（+）+HPV（+）组共93例，联合诊断的符合率为86.1%。较单纯使用TCT检测的符合率（72.2%），两者的检测结果比较有统计学差异。（X2=0.502，P=0.019 ，P< 0. 05）；较单纯使用HPVE6/E7 mRNA检测的符合率（82.4%），两者的检测结果比较无统计学差异，（X2=0.314 ，P=0.575 ，P> 0. 05）。

3 讨论

目前大量的研究结果显示，宫颈癌占妇科肿瘤的第一位，其严重威胁妇女的生命及健康，但它也是唯一一种能经医学干预使其发病率和病死率下降的妇科恶性肿瘤[4]，预防和控制宫颈癌的关键问题就是早期预防、诊断和治疗癌前病变，阻断其进展到宫颈癌的潜在危险，因此合理的筛查方案能够有效降低宫颈癌的发病率。国内外学者一致认为人乳头瘤病毒的持续感染在宫颈癌前病变及宫颈癌发病过程中发挥主要作用[5]。

刘红卫[6]等研究表明中、重度CIN（CINⅡ和CINⅢ），其人乳头瘤病毒感染率明显高于轻度CIN和宫颈炎，HPV感染在CINⅠ患者中为70%-78%；在CINⅡ或CINⅢ患者中为80%-89%；在宫颈癌患者中则超过95%。高危型HPV的感染与子宫颈病变的发生、进展有关。在宫颈细胞学正常的女性中，高危HPV的检出率为9.38%，因此早期筛查检测HPV对于预防和控制宫颈癌的发生具有重要意义。在有性生活的男性和女性中，至少有75%将在一生中的某个时间感染HPV病毒。HPV病毒感染主要通过性交传播，其感染情况直接与女性的性伴侣数，性伙伴的性伴侣数有关。最近，美国阴道镜及宫颈病理协会（ASCCP）和美国癌症协会（ACS）等权威组织为临床医师如何应用HPV检测联合细胞学筛查提供如下建议：对30岁以上妇女除细胞学筛查外还应行HPV检测；对于细胞学和HPV检测结果均为阴性的妇女可3年后再行筛查；对于细胞学正常而HPV 检测阳性的妇女发生HSIL病变的可能性相对较低，故不必常规行组织学检查，但这些妇女应在6-12个月后复查细胞学和HPV检测；对于细胞学和HPV检测均异常者应积极行组织学检查。本研究结果显示该两种检测方法不同，在宫颈早期病变的筛查中不能相互替代； 两种方法联合应用可使阳性检出率提高。

另有相关研究[7]报道高危型HPV的病毒载量与宫颈病变的程度有明显的相关性，HPV病毒载量水平越高，其患宫颈癌的机会越大。所以在女性人群尤其是亚临床女性中跟踪监测HPV病毒载量水平对预防宫颈病变的意义重大。TCT显示的是细胞变化的异常，而HPVE6/E7 mRNA检测的是病毒含量，对于CIN I-III 级患者，如果检测HPV持续阳性，其转为宫颈癌的机率明显增加。笔者认为，对于HPVE6/E7 mRNA检测阳性患者应当积极进行阴道活检，TCT 联合HPV-DNA 分型检查可降低漏诊率，相互取长补短，适用于临床上进行宫颈癌及癌前病变的筛查， 具有较高的临床应用价值。TCT、HPVE6/E7mRNA检测配合阴道活检对宫颈病变筛查具有重要的价值。目前，世界各国卫生组织专家一致推荐： 高危HPV 检测联合液基细胞学检查是宫颈癌及其癌前病变筛查的最佳方法，再对阳性结果进行常规宫颈活检病理确诊，能为宫颈癌的防治提供最可靠的依据〔8〕。

参考文献

[1] 郝敏，王静芳. 宫颈流行病学研究进展[J]. 国外医学·妇幼保健分册， 2005， 16（ 6） ： 404.

[2] Ault KA. Epidemiology and natural history of human papillomavirus infections in the female genital tract[J]. Infect Dis ObstetGynecol， 2006， 14（ 23） ： 40470.

[3] Wis-DraperT，Wells S.Papillomavirus E6 and E7 proteins and their cellular targets[J]. Front Biosci，2008；1（13）：1003-1017.

[4] Syrjanen S，Shabalova IP，Petrovichev N，et al.Human papillomavirus testing and conventional Pap smear cytology as optional screening tools of women at different risks for cervical cancer in Countries of the former Soviet Union[J].J Low Genit Tract Dis，2002，（6）：97-110.

[5] Rodon R，Wu TC.How will HPV vaccines affect cervical cancer[J]. Nature Rev，2006，（6）：753-763.

[6] 刘红卫，刘郁明，成艳.子宫颈病变2015例与高危型HPV感染情况分析[J].陕西医学杂志，2010，39（10）：1327-1328.

[7] 何桂蓉.HPV DNA 病毒载量检测在亚临床女性宫颈癌筛查中的应用价值[J].现代检验医学杂志，2009，24（4）：127-129.

[8] 崔元日. 联合应用HPV 检测和宫颈液基薄层细胞学检测筛查宫颈癌及癌前病变〔J〕. 中国伤残医学，2008，16 （ 6） ： 58

作者简介：

袁冬兰，女，1973年11月，籍贯：江苏泰州；职称：副主任医师；学历：本科；研究方向：妇科肿瘤；

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