免疫组化联合抗体在腹膜间皮瘤与卵巢浆液性癌鉴别中的应用

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摘要：目的 研究CK5/6、CK8/18、CEA、Vimentin（Vim）、Calretinin（Cal）、D2-40、ER、PR、CA125在腹膜间皮瘤与卵巢浆液性癌中的表达情况，寻找后穹隆穿刺活检标本中鉴别二者最有效的抗体组合。方法 选取我院2013年1月～2014年12月盆腔肿瘤手术标本66例，按照不同病种分为二组，卵巢低级别浆液性癌40例，腹膜上皮型恶性间皮瘤26例，采用常规HE染色观察二者形态学特点，并应用免疫组织化学SP法检测CK5/6、CK8/18、CEA、Vim、Cal、D2-40、ER、PR、CA125的表达情况。结果 上皮型恶性间皮瘤与低级别卵巢浆液性癌组织学形态极其相似，常规HE切片中鉴别非常困难。免疫组织化学显示上皮型恶性间皮瘤CK5/6、CK8/18、CEA、Vim、Cal、D2-40、ER、PR、CA125阳性率分别为100%、100%、3.8%、76.9%、85%、95.2%、3.8%、0%、7.7%；而在卵巢浆液性癌中的阳性率分别为0%、100%、87.5%、0%、0%、0%、80%、85%、95%，二者对9种抗体的阳性率差异显著。结论 CK5/6、Cal、D2-40在间皮瘤中具有较强的敏感性和特异性，而卵巢癌在ER、PR、CA125中高表达，采用形态学和免疫组化相结合的方法，对活检标本中卵巢浆液性癌和上皮型恶性间皮瘤的鉴别诊断有极大的帮助，对指导临床的准确诊断和正确治疗具有重大意义。

关键词：细针穿刺；卵巢癌；上皮型间皮瘤；免疫组织化学；联合抗体

腹膜恶性间皮瘤（PMM）与低级别卵巢浆液性癌（OSA）细胞学形态极其相似，单纯依靠组织学鉴别二者非常困难，尤其是经后穹隆盆腔肿瘤穿刺标本，由于取材困难，穿刺过程中组织损伤，诊断更加困难，只能依靠免疫组织化学方法进行鉴别诊断。目前标记间皮瘤的抗体较多，但敏感性和特异性差异很大，找到一组简单可靠的抗体组合正成为目前研究的热点。本研究选取我院2013年1月～2014年12月卵巢低级别浆液性癌40例，腹膜上皮型恶性间皮瘤26例，应用CK5/6、CK8/18、CEA、Vim、Cal、D2-40、ER、PR、CA125九种抗体对盆腔上皮型恶性间皮瘤和卵巢浆液性癌进行检测，希望找到鉴别二者较好的抗体组合。

1资料与方法

1.1一般资料 选用我院2013年1月～2014年12月盆腔肿瘤手术标本66例，其中上皮型恶性间皮瘤26例，男性17例，女性9例，16例有石棉接触史，年龄35～72岁，平均（52.8±5.6）岁。卵巢低级别浆液性癌40例，年龄40～75岁，平均（50.5±12.4）岁。

1.2 SP法免疫组化试剂盒来源（表1）

1.3方法 所有标本均经4%中性甲醛固定，常规4μm厚度连续切片，HE染色。免疫组化采用SP法，严格按照使用说明书操作，DAB显色，苏木精复染、脱水、透明和封固。以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4结果判定 免疫组化染色阳性信号呈棕褐色或棕黄色，ER、PR定位在细胞核；CK5/6、CK8/18、Cal、Vim定位在细胞浆；D2-40、CEA、CA125定位在细胞浆/膜，阳性细胞数<10%为阴性，≥10%为阳性。

2结果

2.1病理组织学形态 40例卵巢癌病例均为低级别浆液性癌，呈腺管状、乳头状排列，瘤细胞单层或复层，呈矮柱状或立方型，相似于间皮细胞，乳头结构较宽，可见多级分枝，有的间质内可见砂粒体（图1，图2）。26例上皮型恶性间皮瘤光镜下组织结构多样，表现为管状、乳头状、实性巢状等（图3）。细胞圆形或卵圆形，核通常为单个，居中或稍偏位，核仁1～2个，核分裂像少见，少数病例可伴有砂粒体形成。上皮型恶性间皮瘤在CK5/6、Cal、D2-40中高表达（图4～图6），而卵巢癌在ER、PR、CA125中高表达（图7～图9）。

2.2免疫组化表达情况（表2）

3讨论

盆腔肿瘤中，腹膜恶性间皮瘤和卵巢癌为最常见的2种肿瘤，由于组织来源不同，治疗方法也不相同，因此组织学的分型对指导临床的治疗、肿瘤的分期及预后的判断有着重要的意义。有文献报道恶性间皮瘤90%发生于胸膜[1]，3%～12%发生于腹膜[2]。

腹膜间皮瘤是腹腔内恶性度极高的肿瘤，目前尚无有效的治疗方法，大多数死于诊断后的1～2年内，男性发病多于女性，发生于儿童的病例罕见报道[3]。根据国内资料统计，间皮瘤的发病率为0.04%，且多与石棉接触有关[4]，其他原因包括职业和周围环境的接触[5]。近年其发病率有逐年增多的趋势。有研究表明，恶性间皮瘤的潜伏期为35～40年[6]，目前发病率增高的原因，可能与20世纪70年代我国大面积手纺石棉加工有关。

由于间皮细胞的组织学形态多样，在光镜下与卵巢分化好的腺癌很难鉴别，尤其是卵巢低级别浆液性癌，光镜下几乎无法鉴别。所以寻找一组有效的抗体能够鉴别恶性间皮瘤与卵巢癌的组织学类型，对病人的准确诊断和正确治疗尤为必要。由于单一抗体的敏感性、特异性不同，往往达不到鉴别诊断的作用，因此，国际间皮瘤小组建议至少同时使用2种间皮标记和2种其他癌的标记[7]。

3.1 CK5/6 通常标记鳞状上皮和导管上皮的基底细胞、部分前列腺基底细胞以及部分鳞状上皮生发层细胞，腺上皮细胞不表达。在肉瘤样恶性间皮瘤中阳性率较低，而在上皮型间皮瘤中高表达，本结果中，CK5/6在PMM中的阳性率极高（100%），而卵巢癌全部阴性。可以作为PMM的可靠标记物用于PMM和OSA的鉴别诊断中。

3.2 CK8/18 是单层腺上皮来源肿瘤的首选标记物，鳞状上皮不表达，由于间皮细胞多潜能分化的特性，CK8/18在间皮肿瘤也高表达，通常和CK5/6联合使用标记间皮细胞。

3.3 CEA 是腺癌常用的标记物，在少部分间皮瘤中有局灶弱的阳性表达，腺癌细胞分化越低则CEA含量越高。本结果CEA在OSA中表达（87.5%）明显高于PMM中的表达（3.8%），因此CEA是鉴别腺癌和间皮瘤的重要标记物，可作为二者鉴别的一线抗体使用。

3.4 Vim 在梭形细胞为主型恶性间皮瘤呈阳性表达，国外的研究也表明，Vim在间皮瘤的阳性率较高，而在腺癌为阴性，虽然Vim在本结果中的表达率仅为76.9%。而在卵巢腺癌中全部为阴性表达，二者之间阳性率差异仍十分显著。

3.5 Calretinin是一种钙结合蛋白，表达于神经组织、脂肪组织、间皮细胞，腺癌极少表达，因此，Calretinin是上皮样间皮瘤最敏感和特异的抗体，在鉴别腺癌和间皮瘤中有较强的特异性。

3.6 D2-40 是一种分子量为40kDa的糖蛋白，主要存在于胚胎睾丸和睾丸生殖细胞肿瘤中，近几年的研究表明，D2-40在上皮型间皮瘤中亦高表达，本研究D2-40在间皮瘤中表达率为95.2%，与文献报道一致。因此可作为间皮瘤鉴别诊断有用的标记物。

3.7 ER 雌激素受体存在于正常子宫内膜、平滑肌细胞以及正常乳腺的上皮细胞中 ，在间皮瘤中阴性表达，在卵巢浆液性肿瘤中阳性表达，此抗体识别雌激素受体的N端功能区（A/B区），研究表明ER表达阳性的病人对其进行激素治疗往往有效，预后较好。

3.8 PR 孕激素受体表达有两个异构体PRA（94KDa）和PRB（114 Kda），其功能是作为配体活化后转录因子存在于子宫内膜、卵巢及乳腺上皮细胞中，间皮瘤阴性表达。PR也可作为鉴别间皮瘤的有用标记物之一。

3.9 CA125 几乎在所有的卵巢浆液性癌中阳性表达，宫颈、子宫内膜、乳腺、胃肠道及甲状腺腺瘤均有少数表达。而卵巢粘液性肿瘤和间皮瘤阳性率很低，对鉴别诊断有重要的参考价值。单纯的形态学诊断间皮瘤非常困难，目前对于间皮瘤的诊断基本依赖于免疫组化的辅助诊断，迄今为止尚无一种抗体对间皮瘤完全特异，都是依靠一组抗体的联合应用。以往用于间皮瘤的抗体组还有HBME、WT1、P-CK等，但由于抗体昂贵或敏感性、特异性、稳定性差等原因没有广泛的推广使用。本研究抗体组试剂便宜、操作简单，特异性、敏感性较高，使间皮瘤的诊断与鉴别诊断水平有了很大提高。

综上所述，由于恶性间皮瘤的病理形态多样，对于临床影像学和组织学鉴别困难的病例，需要依赖于免疫组织化学抗体的联合检测。抗体组CK5/6、Vim、D2-40和 Cal对间皮瘤具有较强的敏感性和特异性，而CK8/18、CEA、ER、PR、CA125对腺癌敏感，两组抗体的联合应用对PMM和OSA的鉴别诊断有重要意义。

参考文献：

[1]夏海玲，张幸.恶性间皮瘤生物标志研究进展[J].中华劳动卫生职业病杂志，2014，32（5）：397-400.

[2]李媛，吴人亮.儿童胸膜恶性小细胞型间皮瘤一例[J].中华小儿外科杂志，2002，23（5）：480-481.

[3]魏思忱，郑国启，王志刚，等.沧州地区162例腹膜恶性间皮瘤临床资料回顾性分析[J].中华内科杂志，2013，52（4）：335-336

[4]倪灿荣.免疫组织化学实验新技术及应用[M].北京：北京科学技术出版社，1993：326.

[5]胡余昌，阮秋容.恶性上皮性间皮瘤免疫组化特征及其鉴别诊断[J].诊断病理学杂志，2003，10（5）：264-266.

[6]邓群益.间皮瘤相关特异性抗体的研究进展[J].诊断病理学杂志，2000，7：67.

[7]王静，朱江.女性腹膜恶性间皮瘤的临床病理及预后研究[J].临床肿瘤学杂志，2013，18（3）：238-241.编辑/申磊

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